質粒是基因工程中最常用的運載體,擔負著將目的基因轉移到宿主細胞中的重要使命。高速離心機對從細菌中分離質粒有非常重要的作用。以下是一實驗室質粒提取的步驟,使用蜀科TD-20高速離心機進行操作:
1、將擴增好的菌液重懸,轉入1.5mL離心管中;
2、用質粒小量抽提試劑盒,按說明書要求提取質粒;
3、細菌高速離心1min,徹底去除上清;
4、加入250ulRB溶液,振蕩器充分懸浮細菌;
5、加入250ulLB溶液。立即上下顛倒10次,使細菌裂解,室溫,放置2min;
6、加入250ulNB溶液。立即上下顛倒10次,使之充分中和,室溫,放置2min;
7、室溫,15000rpm,蜀科高速離心機離心15min;
8、將吸附柱放入收集管內,離心得到的上清轉移至吸附柱,室溫,15000rpm,蜀科高速離心機離心30s;
9、棄廢液,將吸附柱放入收集管,加入700uL WB溶液到吸附柱中,15000rpm,蜀科高速離心機離心30s;
10、重復上一操作;
11、將吸附柱放入干凈的1.5mL離心管中,加30-50uL預熱的Elution Buffer,室溫,放置2min,高速離心1min;
12、樣品進行電泳檢測:1%瓊脂糖凝膠電泳,上樣量為2uL,紫外燈下觀察,最明亮的帶為超螺旋形式,可以在一定程度上表明提取質粒的純度。
質粒提取是基因工程最基礎的一步,高速離心機的運用非常頻繁,蜀科高速離心機全系采用轉頭識別技術,有效防止轉頭超速運轉,保護機器和人員安全,技術性能位居行業前列,歡迎選購!
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